D2F2小鼠乳腺癌細(xì)胞系

保存：4℃保存一年，-20℃長(zhǎng)期保存
用途：可用于科研實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。
培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

D2F2小鼠乳腺癌細(xì)胞系

細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)：
1、如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決
2、貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；適當(dāng)提高血清濃度（最高不能超過(guò)20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3、生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)
 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）
1、吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?-2min）
2、鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让?，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散
3、細(xì)胞取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4、注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）
1、收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清，（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）
2、貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請(qǐng)優(yōu)先選擇直徑6cm的培養(yǎng)皿進(jìn)行傳代培養(yǎng)
3、如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室CRL-5870    NCI-H1435 Cells    ，公司專業(yè)提供美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)來(lái)源正常細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說(shuō)明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！

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CRL-5985    NCI-H2122 Cells    ，公司專業(yè)提供美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)來(lái)源正常細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說(shuō)明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！
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CRL-5930    NCI-H2172 Cells    ，公司專業(yè)提供美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)來(lái)源正常細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說(shuō)明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！
CRL-5935    NCI-H2228 Cells    ，公司專業(yè)提供美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)來(lái)源正常細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說(shuō)明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！
CRL-5938    NCI-H2286 Cells    ，公司專業(yè)提供美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)來(lái)源正常細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說(shuō)明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！
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HTB-119    NCI-H69 Cells    ，公司專業(yè)提供美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)來(lái)源正常細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說(shuō)明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！
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HTB-68    SK-MEL-2 Cells    ，公司專業(yè)提供美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)來(lái)源正常細(xì)胞系、腫瘤細(xì)胞系、癌細(xì)胞系（三千多種），提供細(xì)胞株生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存說(shuō)明書信息，我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，能提供細(xì)胞培養(yǎng)*的技術(shù)支持，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！
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